PCR(聚合酶鏈式反應)技術(shù)已成為分子生物學(xué)研究必備技能,DNA聚合酶是PCR能否成功的關(guān)鍵。從早期被發(fā)現的Taq DNA聚合酶到現在新酶的發(fā)現和對舊酶的改造,DNA聚合酶的保真性、特異性、靈敏度等都獲得了明顯的改進(jìn)。
隨著(zhù)相關(guān)研究技術(shù)的深入和研究樣本越發(fā)復雜,在基因克隆、二代測序、定點(diǎn)突變等實(shí)驗中,都面臨著(zhù)更加嚴苛的PCR結果準確性要求。因此,對DNA聚合酶的保真性要求日益提高。超保真DNA聚合酶有聚合中心和酶切中心,聚合中心具有5'→3'的DNA聚合酶活性,可沿 5'→3'方向催化合成 DNA;酶切中心具有3'→5'外切酶活性,即校正活性,可以進(jìn)行堿基錯配的修復,保證DNA復制的忠實(shí)性。
超保真DNA聚合酶工作原理示意圖
PCR過(guò)程中錯配的核苷酸會(huì )從聚合中心進(jìn)入酶切中心被切除(圖a、b);
切除后此位點(diǎn)會(huì )重新結合正確的核苷酸,繼續從5’到3’進(jìn)行精準復制(圖c)。
超保真酶品類(lèi)繁多,如何篩選一款適合自己的呢?
GenStar? SuperNova系列,性?xún)r(jià)比之王,專(zhuān)治超保真DNA聚合酶選擇困難癥。
GenStar? SuperNova系列五大特點(diǎn)
1、保真度超高:保真度是 Taq DNA Polymerase 的80倍;
2、延伸速度快:延伸速度約為 15-30 s/kb,不超過(guò) 1 min/kb;
3、擴增性能優(yōu):長(cháng)片段擴增能力強,且可高效擴增復雜基因組模板和高 GC 模板;
4、模板適用性好:適用于多種物種來(lái)源模板的擴增;
5、應用范圍廣:適用于基因克隆、高通量測序、定點(diǎn)突變等;
優(yōu)化的延伸因子,提高擴增速度和延伸性能
SuperNova DNA Polym-erase延伸速度約為 15-30 s/kb,簡(jiǎn)單模板擴增長(cháng)度可達20 kb,復雜模板可達13 kb
SuperNova DNA Polymerase擴增效率高
復雜模板(如GC-rich)擴增能力強,可選擇產(chǎn)品中配備的High-GC Enhancer,可進(jìn)一步提高擴增效率
模板適用性廣泛
適用于多物種來(lái)源模板的擴增,滿(mǎn)足不同科研需求。